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鼠牙髓干细胞提取方法

32 次浏览 编辑 基因细胞服务中心
2020-10-30 06:40:42

干细胞是具有自我更新和分化潜力的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞。目前,骨髓、肌肉、神经、上皮等组织的成体干细胞分离培养成功。牙髓干细胞是位于牙髓组织的成体干细胞。2000年,Gornhtos等首先成功地分离出人的牙髓干细胞,为干细胞的研究开辟了新的领域。牙髓干细胞具有与其他成体干细胞相似的生物学特性,具有较强的克隆形成能力,可分化为牙髓组织中的终端功能细胞,具有一定的横向分化能力。目前国内外只有人牙髓干细胞培养成功的报道,鼠牙髓干细胞相关研究国内外尚未报道,鼠是实验研究中最常用的模型,具有采访简单、与人同源性高等优点。

 

 

细胞的特性

1)组织来自实验动物的正常牙齿组织。

2)细胞鉴定:STRO-1免疫荧光染色阳性。

3)细胞纯度超过90%。

4)不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式:长梭形,不规则细胞,靠墙培育。

 

收到常温细胞后如何处理:

1.首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。如果有的话,请拍照,及时联系我们公司。

2.用75%的酒精擦拭细胞培养瓶表面,在显微镜下观察细胞状态。由于运输问题,部分贴壁细胞。

少量从瓶壁脱落,首先不要打开培养瓶盖,将细胞放入细胞培养箱静置培养2~4小。

此时,为了稳定细胞状态。

3.仔细阅读细胞说明书,了解墙壁特性(墙壁/悬浮)、细胞形态、使用等细胞相关信息。基础培养基、血清比、所需细胞因子、传代比、换液频率等。

4.静置完成后,取出细胞培养瓶,检查镜子,拍照,记录细胞状态(拍照作为后续服务)。根据)细胞传承培养后,建议定期拍照,记录细胞的成长状态。

5.贴壁细胞:细胞生长密度超过80%,可正常传播的80%以下,去除细胞培养瓶内培养。培育基础,预约5ml左右继续培育,在细胞密度达到80%左右之前进行传代操作,盖子稍微可以拧松。

6.悬浮细胞:将细胞培养瓶内的液体全部转移到50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可以收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹,悬浮。镜检时,细胞密度超过80%时,可将细胞悬液分为2个细胞培养瓶内培养,将培养基添加到5ml。

细胞密度不超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培育,直到细胞密度达到80%左右。


鼠牙髓干细胞提取方法

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